实验教学

课程名称：中药分析学实验

课程代码：05193 课程性质：专业课

总学时：36 学分：2.0

考核方式：考查

开课单位： 药学院  适用专业：中药学

一、课程教学目标

《中药分析学实验》在中药学专业中作为一门专业课程。课程目标是培养学生掌握中药质量控制与安全性评价的基本理论和方法，具备能够运用综合理论知识解决中药质量与安全性评价及中药检验等实际问题的科学实验技能，并在中药研究、生产、管理、流通、教育、国际交流及文化传播等行业具备发展潜能和创新创业能力。本课程思政目标是充分发挥好专业课程的育人作用，引导学生坚定理想信念，热爱中医药事业，树立实事求是的科学态度和一丝不苟的工作作风，具有良好的职业道德及专业素质，志愿为人类健康做出应有的贡献。本课程教学目标支撑专业毕业要求指标点的（二）3，（二）5，（三）1、4、8。

二、实验项目及学时分配

本课程计划课时为36学时，第六学期3-14周，每周3学时。课程教学内容包括淫羊藿药材中总黄酮含量测定、双黄连口服液鉴别、双黄连口服液检查、双黄连口服液中黄芩苷和绿原酸含量测定5个综合性实验，以及中药或民族药中有效成分含量测定（HPLC）1个创新性实验。

《中药分析学实验》课程实验项目及学时分配

三、考评方式

按照药学院实验课程考核办法规定，本课程成绩评定采用百分制，以100分为满分，其中，过程性评价和终结性评价各占50%。过程性评价环节包括：实验报告（15%）、实验态度（10%）和实验操作（25%）三个项目，教师应根据每次实验实际情况进行评分并记录。终结性评价环节包括：笔试（20%）、操作考试（30%）。

四、实验教学内容与要求

实验一 淫羊藿药材中总黄酮含量测定

【实验/实训性质】

综合性实验

【实验/实训目的与要求】

1.掌握紫外－可见分光光度计的操作步骤。

2.掌握标准曲线法测定淫羊藿药材中总黄酮含量的方法。

【实验/实训内容】

1.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含 85.0µg的溶液，作为对照品溶液。

2.标准曲线的绘制：精密吸取上述淫羊藿苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml分别置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白溶液，于270nm波长处分别测定吸光度值，分别重复3次，以其吸光度值的平均值为纵坐标，对应的对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数。

3.供试品溶液的制备：取样品粉末（粉碎过40目筛）约0.2g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇20 ml，称定重量，超声处理1h，取出放置至室温，再称定重量，用稀乙醇补足损失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，精密量取续滤液0.5ml，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

4.测定法：取供试品溶液，以相应试剂为空白，照紫外－可见分光光度法（通则0401），在270nm波长处测定吸光度，计算，即得。

【实验/实训方法】

要求学生课前预习，教师课堂讲授实验要点及注意事项，学生以4人为一个小组分组进行实验。

【实验/实训时数】

6学时

【注意要点】

1.取样量要准确，制备供试品溶液时避免损失。

2.仪器操作时应严格按照操作规程进行。

3.采用标准曲线法应注意的问题。

（1）制备一条标准曲线至少需要5～7个点，并不得随意延长。

（2）待测溶液浓度应在标准曲线线性范围内。

（3）待测溶液和对照品溶液必须在相同条件下进行。

4.一般要求配制待测样品的浓度要在线性范围内，最好是在标准曲线的中部，这样可减少误差提高准确度。

实验二 双黄连口服液鉴别

【实验/实训性质】

综合性实验

【实验/实训目的与要求】

1.掌握中药制剂性状鉴别的内容和方法。

2.掌握中药制剂薄层色谱定性鉴别的原理和方法。

【实验/实训内容】

1.性状：本品为棕红色的澄清液体；味甜，微苦。

2.鉴别

（1）取本品1ml，加75%乙醇5ml,摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品、绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每lml含O.lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502)试验，吸取上述三种溶液各1～2μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与绿原酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（2）取本品lml，加甲醇5ml，振摇使溶解，静置，取上清液，作为供试品溶液。另取连翘对照药材0. 5g，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【实验/实训方法】

要求学生课前预习，教师课堂讲授实验要点及注意事项，学生以2人为一个小组分组进行实验。

【实验/实训时数】

3学时

【注意要点】

1.薄层板或薄膜板应平整、均匀、无麻点、无气泡、无污染。

2.点样基线距底边1.0～1.5cm，点样直径一般不大于2mm。点样时最好将对照品点和供试品点交叉点样。

3.如果展开效果不好可考虑预平衡，一般预平衡时间为15～30分钟。

实验三 双黄连口服液检查

【实验/实训性质】

综合性实验

【实验/实训目的与要求】

1.掌握口服溶液剂装量差异的检查方法及要求。

2.掌握口服溶液剂相对密度、pH值的检查原理和方法。

【实验/实训内容】

1.装量差异检查（通则0123)：取供试品5支，将内容物分别倒入经校正的干燥量筒内，在室温下检视，每支装量与标示装量相比较，少于标示装量的不得多于1支，并不得少于标示装量的95％。

2. 相对密度检查（通则0601)：采用比重瓶法测定，应不低于1.12。

取洁净、干燥比重瓶，精密称定其重量。装满供试品（温度低于20℃）后，插入中心有毛细孔的瓶塞，用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干，置于20℃的恒温水浴中，放置若干分钟，随着供试液温度的上升，过多的液体不断从塞孔溢出，随时用滤纸将瓶塞顶端擦干，待液体不在由塞孔溢出，迅速将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品重量后，将比重瓶中的供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，计算。

3.pH值检查（通则0631)：采用酸度计测定，应为5.0～7.0。

测定供试品前，分别配制苯二甲酸盐和硼砂标准缓冲液，进行酸度计校正，待仪器校正至符合要求后再进行供试品pH值测定。

【实验/实训方法】

要求学生课前预习，教师课堂讲授实验要点及注意事项，学生以2人为一个小组分组进行实验。

【实验/实训时数】

3学时

【注意要点】

1. 装量差异检查使用的量筒因为经过校正的干燥量筒。

2. 用比重瓶测定时的环境（指比重瓶和天平的放置环境）温度应略低于20°或各品种项下规定的温度。

3. 测定pH值时：（1）应严格按仪器的使用说明书操作。（2）注意选择两种pH值约相差3个pH单位的标准缓冲液校正仪器，并使供试品溶液的pH值处于两者之间。仪器定位后，再用第二种标准缓冲液核对仪器示值，误差应不大于±0.02pH单位。（3）每次更换标准缓冲液或供试品溶液前，应用纯化水或所换的标准缓冲液或供试品溶液充分洗涤电极，然后将溶液吸尽。（4）配制标准缓冲液与溶解供试品的水，应是新沸过并放冷的纯化水，其pH值应为5.5～7.0。（5）标准缓冲液一般可保存2～3个月，但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象 时，不能继续使用。

实验四 双黄连口服液中黄芩苷含量测定

【实验/实训性质】

综合性实验

【实验/实训目的与要求】

1.掌握高效液相色谱仪的操作步骤。

2.掌握高效液相色谱法测定中药制剂有效成分含量的基本原理和方法，学会用外标一点法定量分析。

【实验/实训内容】

照高效液相色谱法（通则0512)。

1.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1 )为流动相，检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低与1500。

2.对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含0.1mg的溶液，即得。

3.供试品溶液的制备：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

4.测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

【实验/实训方法】

要求学生课前预习，教师课堂讲授实验要点及注意事项，学生以4人为一个小组分组进行实验。

【实验/实训时数】

6学时

【注意要点】

1.注意正确使用移液管，取样量要准确，制备供试品溶液时避免损失。

2.仪器操作时应严格按照高效液相色谱仪操作规程进行。

3.所有流动相使用前必须脱气。

4.注意含量计算结果有效数字保留3位。

实验五 双黄连口服液中绿原酸含量测定

【实验/实训性质】

综合性实验

【实验/实训目的与要求】

1.熟练掌握高效液相色谱仪的操作步骤。

2.掌握高效液相色谱法测定中药制剂有效成分含量的基本原理和方法，以及外标一点法定量计算原理与减少结果误差的条件控制。

【实验/实训内容】

照高效液相色谱法（通则0512)。

1.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸（20:80:1 )为流动相，检测波长为324nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。

2.对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每lml含40μg的溶液，即得。

3.供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，置50ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

4.测定法：分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

【实验/实训方法】

要求学生课前预习，教师课堂讲授实验要点及注意事项，学生以4人为一个小组分组进行实验。

【实验/实训时数】

6学时

【注意要点】

1.注意正确使用移液管，取样量要准确，制备供试品溶液时避免损失。

2.仪器操作时应严格按照高效液相色谱仪操作规程进行。

3.所有流动相使用前必须脱气。

4.注意含量计算结果有效数字保留2位。

实验六 中药或民族药中有效成分含量测定（HPLC）

创新性实验

【实验/实训性质】

设计性、综合性、创新性实验

【实验/实训目的与要求】

1.掌握HPLC法测定中药中有效成分含量的实验方案设计方法。

2.掌握含量测定方法学验证实验内容和数据要求。

3.熟悉中药有效成分含量测定的实验研究步骤。

【实验/实训内容】

1.学生根据老师给定的实验测定中药或民族药对象，每组查阅相关资料，写出实验设计方案（实验原理、内容与步骤，包括方法学验证试验的内容等）。

2.提交方案给教师评阅并反馈意见，各组学生按意见修改方案后以PPT在班级汇报讨论，再次完善方案，确定设计的实验方案。

3.按照确定的实验方案进行实验研究，包括标准溶液、阴性样品溶液、供试品溶液的制备，测定条件的筛选，系统适用性试验，含量测定方法学验证试验等。

4.含量测定结果数据处理。

【实验/实训方法】

学生以6～8人为一个小组分组进行实验方案设计，每个小组学生按照确定的实验方案进行实验研究，记录实验现象及结果，并完成实验报告1篇。教师在实验课堂上只起到辅助作用，如排除仪器故障、防止意外等。

【实验/实训时数】

12学时

【注意要点】

1.要求每组学生根据所设计的实验方案写出实验所需的仪器与试剂以及应注意的事项。

2.仪器操作时应严格按照高效液相色谱仪操作规程进行。

3.所有流动相使用前必须脱气。

五、课程资源

教材：药物分析教研室自编中药分析学实验讲义

参考书目：

1.国家药典委员会.中国药典（一、四部）[S]. 北京: 中国医药科技出版社，2020.

2.梁生旺，贡济宇.中药分析[M].北京：中国中医药出版社，2016.

3.贡济宇，张丽.中药分析学[M].北京：人民卫生出版社，2019.

4.张丽.中药制剂分析[M].北京：化学工业出版社，2018.

阅读材料：

1.国家药典委员会.中国药典（一、四部）[S]. 北京: 中国医药科技出版社，2020.

2.高文远.《现代中药质量控制及技术》[M]. 北京: 科学出版社，2010.

3.罗国安，梁琼麟，王明义.《中药指纹图谱—质量评价、质量控制与新药研发》[M].北京：化学工业出版社，2009.

4.《中国中药杂志》《药物分析》《中草药》《中成药》《中药材》等中外文期刊杂志相关文章。

六、有关说明

先修课程：《无机化学》《有机化学》《分析化学》《基础化学实验三》《中药化学》《药用植物学》《临床中药学》《方剂学》《药理学》《中药炮制学》《中药鉴定学》。

后续课程：《药事管理与法规》《新药研制与开发》《中药学专业综合实验》，毕业实习等。

实践环节的纪律与注意事项：

1.实验前认真预习，明确本次试验的目的要求，理解实验原理，了解实验步骤和注意事项。

2.学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从实验老师的指导。在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应请教实验老师并遵守指导，不要随意进行试验，以免损坏仪器、浪费试剂，应防止意外事故的发生。

3.爱护实验室的仪器设备，使用时按照仪器操作规程进行操作，使用完毕后进行登记。试验中如有仪器损坏应立即报告老师。

4.实验时应严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据和实验现象。应善于思考，学会运用所学理论知识解释实验现象，分析实验中出现的问题。

5.实验过程中应注意防火、防爆、防腐、防污，牢固树立“安全第一”的意识。

6.实验结束后仪器试剂应回归原处，玻璃仪器应清洗干净，有毒、有腐蚀性的废液应倒入指定的废液缸内。

7.试验台面要擦拭干净，值日生负责清理实验室，检查水、电开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。

8.实验报告的撰写应重点突出、条理清晰、语言简练、页面整洁。

其他需要说明的事项：无

 

大纲撰写人：郭江涛

大纲审核人：徐文芬